11(5)06

Nauka innov. 2015, 11(5):67-75 
https://doi.org/10.15407/scin11.05.067

М.Т. Юркив1, Е.А. Куриленко1, Р.В. Василишин1, К.В. Дмитрук1, Н.Б. Мартинюк2, В.В. Скороход2, А.А. Сибирный1
1Институт биологии клетки НАН Украины, Львов
2Частное акционерное общество «Энзим», Ладыжын

 

Разработка технологии получения препаратов глутатиона на основе сконструированных активных суперпродуцентов этого трипептида у дрожжей

Раздел: Научно-технические инновационные проекты Национальной академии наук Украины
Язык статьи: украинский
Аннотация: С помощью метаболической инженерии сконструирован штамм метилотрофных дрожжей Hansenula polymorpha с усиленной экспрессией генов GSH2, кодирующего γ-глутамилцистеинсинтетазу, и MET4, кодирующего транскрипционный активатор генов биосинтеза цистеина (предшественник синтеза глутатиона). Полученный рекомбинантный штамм характеризовался повышенной продуктивностью синтеза глутатиона по сравнению со штаммом дикого типа в лабораторных условиях. Проведено оптимизацию синтеза глутатиона сконструированным рекомбинантного штамму H. polymorpha. Разработана полупромышленная модель технологии получения глутатиона с использованием сконструированного дрожжевого штамма-продуцента.
Ключевые слова: глутатион, дрожжи, Hansenula polymorpha, метаболическая инженерия.

Полный текст (PDF)

Литература:
1. Penninckx M.J. A short review on the role of glutathione in the response of yeasts to nutritional, environmental, and oxidative stresses // Enzyme Microb Technol. — 2000. — 26. — P. 737—742.
2. Pocsi I., Prade R., Penninckx M. Glutathione, Altruistic Metabolite in Fungi // Advances in Microbial Physiology. — 2004. — V. 49. — P.13—86.
3. Li Y., Wei G., Chen J. Glutatione: a review on biotechnological production // Applied Microbiology and Bio technology. — 2004. — P. 305—315.
4. Gellisen G. Hansenula polymorpha — biology and applications. — Weinheim: Wiley VCH; 2002.
5. Ubiyvovk V.M., Ananin V.M., Malyshev A.Y. et al. Оptimization of glutathione production in batch and fedbatch cultures by the wild-type and recombinant strains of the methylotrophic yeast Hansenula polymorpha DL-1 // BMC Biotechnol. — 2011. — V. 11. — P. 8.
6. Sambrook J., Fritsh E.F., Maniatis T. Molecular Cloning: A Laboratory Manual. Cold Spring Harbor Laboratory // Cold Spring Harbor, New York. — 1989.
7. Faber K.N., Haima P., Harder W. et al. Highly-efficient electrotransformation of the yeast Hansenula polymorpha. Curr Genet. — 1994. — 25. — P. 305—310.
8. Griffith O., Mulcahy R. The enzyme of glutathione synthesis: γ-glutamylcysteine synthetase //Advances in enzymology and related aress of molecular biology. — 1999. — V.73. — P. 209—267.
9. Grabek-Lejko D, Kurylenko O.O, Sibirny V.A. et al. Alcoholic fermentation by wild-type Hansenula polymorpha and Saccharomyces cerevisiae versus recombinant strains with an elevated level of intracellular glutathione // J. Ind. Microbiol Biotechnol. — 2011. — 38(11). 1853—9.
10. Taxis C., Knop M. System of centromeric, episomal, and integrative vectors based on drug resistance markers for Saccharomyces cerevisiae. BioTechniques. — 2006. — 40. — P. 73—78.
11. Wang Z., Tan T., Song J. Effect of amino acids addition and feedback control strategies on the high-cell-density cultivation of Saccharomyces cerevisiae for glutathione production // Process Biochemistry. — 2007. — 42. — P. 108—111.